RET（Rearranged during transfection）基因于1985年首次在人T淋巴瘤细胞中发现，且被鉴定为一个原癌基因，RET基因位于人类10号常染色体长臂（10q11.2），编码一种存在于细胞膜上的受体酪氨酸激酶（RTK）[1]。RET蛋白在成熟过程中，蛋白前体通过不同的选择性剪切方式，主要形成两种蛋白亚型RET-9和RET-51。RET激酶被神经胶质细胞系来源的神经营养生长因子GDNF激活，GFNF与GFRα1结合形成GDNF-GFRα1复合物，此复合物再与RET结合形成三复合体，引起RET的二聚化，并引起酪氨酸残基自磷酸化，从而激活下游信号通路[2]，包括RAS/MARK、PI3K/AKT、PLCγ/PKC等信号通路，进而引起细胞的增殖分化、迁移、再生和生长等[1]。

图1. a) RET激酶结构;b) RET激酶活化机制及信号通路。

(图片来源于参考资料[2])

RET基因致癌机制，主要有基因融合、点突变、基因扩增和染色体重排等[3]。染色体的重组常会导致RET基因中间断裂后与不同的上游基因发生融合，进而形成驱动肿瘤细胞增殖的融合基因。在1990年和2012年先后在甲状腺乳头状癌、肺腺癌和慢性髓系白血病中发现这一变异。其中融合基因主要有：KIF5B-RET（最多），CCDC6-RET和NCOA4-RET；RET基因在NSCLC患者主要以RET基因融合形式发生改变，研究显示非小细胞肺癌中KIF5B‐RET融合约占所有RET融合的 68.3 %，其次为CCDC6‐RET (16.8 %)及NCOA4‐RET (1.2 %)[4]。虽然RET基因在NSCLC患者中的发病率仅为1.4 %-2.5 %，但是我国的患者基数非常大，因而携带RET基因融合的NSCLC患者并不少见[5]。点突变多位于Gate keeper残基，主要是V804位点（V804M，V804L），还包括溶剂前沿突变G810位点（G810R，G810S，G810C，G810A，G810V）、M918T和C634位点（C634R，C634G，C634F，C634S，C634W，C634Y，C634K）突变等[1]。

图2. 不同癌症中RET基因改变的概述。

(图片来源于参考资料[3])

图3. RET基因的主要融合方式和点突变位点。

(图片来源于参考资料[1])

2011年和2013年，FDA和EMA分别批准Vandetanib和Cabozantinib用于治疗进展的晚期的MTC患者，并已在RET融合阳性NSCLC患者中显示出活性[1]。但上述药物整体对于RET基因融合突变的靶向特异性并不强，其不仅抑制RET蛋白信号，同时会抑制VEGFR、EGFR等其他蛋白，有效性相对较差，且副作用和非靶向毒性增加。2020年5月9日，FDA加速批准了Loxo Oncology公司(礼来旗下)selpercatinib(LOXO-292，Retevmo)上市，用于治疗部分RET融合基因的非小细胞肺癌成人患者，和晚期RET突变阳性甲状腺髓样癌(MTC)患者及晚期或转移的RET融合阳性甲状腺癌患者。这是FDA批准的首款高选择性RET激酶抑制剂。Selpercatinib(LOXO-292)是口服用药的ATP竞争性小分子RET激酶抑制剂，它具有穿透中枢神经系统(CNS)的能力，并且可以靶向激活性RET融合、点突变和某些获得性耐药突变(对包括KIF5B-RET和CCDC6-RET融合类型，以及RET-V804L/M和M918T耐药突变敏感)[1]。2020年9月5日，FDA批准蓝图公司(Blueprint Medicines Corporation)开发的RET抑制剂Pralsetinib(BLU-667，Gavreto)上市，用于治疗RET融合阳性转移性非小细胞肺癌(NSCLC)成人患者[1]。2021年3月24日，BLU667(普拉替尼, 商品名：普吉华®)获得中国国家药品监督管理局(NMPA)批准，用于既往接受过含铂化疗的RET基因融合阳性的局部晚期或转移性NSCLC成人患者，成为国内首个也是目前唯一获批的RET抑制剂[1]。

不过，如同其他靶向药一样，耐药是不可避免的。2020年1月24日，《J Thorac Oncol》报道了2例RET融合非小细胞肺癌患者在使用LOXO-292后出现溶剂前沿突变(RET G810R/S/C)，进而导致LOXO-292耐药。结构模型预测，RET溶剂前沿突变G810R/S/C/V突变在空间上阻碍了Selpercatinib的结合，体外试验证实抗RET多激酶抑制剂MKI和选择性RET TKIs均失去活性，Pralsetinib(BLU-667)对G810S敏感[6]。2021年4月10号，Loxo Oncology公司报道，在患者中出现RET溶剂前沿突变G810位点和门控突变V804位点的双突变，及M918T位点和溶剂前沿突变G810位点的双突变。体外实验结果显示，RET发生双突变后，对Selpercatinib(LOXO-292)和Pralsetinib(BLU-667)抑制剂不敏感[7]。

图4. 选择性RET抑制剂耐药性的模拟。

(图片来源于参考资料[6])

针对RET激酶抑制剂药物开发和需求，中科普瑞昇构建一系列Ba/F3-RET双突变的工程细胞株，用于针对RET靶点的化合物筛序及动物药效评价，欢迎广大客户咨询合作。

细胞株列表

部分细胞株体外验证数据

部分细胞株体内模型验证数据

BLU-667 in Ba/F3-KIF5B-RET Model

BLU-667、LOXO-292 in Ba/F3-KIF5B-RET-V804M Model

BLU-667、LOXO-292 in Ba/F3-KIF5B-RET-V804L Model

BLU-667、LOXO-292 in Ba/F3-KIF5B-RET-G810C Model

BLU-667、LOXO-292 in Ba/F3-KIF5B-RET-G810R Model

BLU-667、LOXO-292 in Ba/F3-KIF5B-RET-G810S Model

部分CDX模型验证数据

LOXO-292 in LC-2/ad Model

LOXO-292 in TT Model

参考文献及图片来源：

1. The importance of the RET gene in thyroid cancer and therapeutic implications. Nature, 2021 May,17:296–306.

2. To Bud or not to Bud: The RET perspective in CAKUT. Pediatr Nephrol. 2014 Apr; 29(4): 597–608.

3. RET Aberrations in Diverse Cancers. Clin Cancer Res; 23(8) April 15, 2017,1988-1997.

4. Curigliano G, et al. 2021 ASCO, Poster 9089.

5.中国非小细胞肺癌 RET 基因融合临床检测专家共识. 中华病理学杂志, 2021, 50(6): 583-591.

6. RET Solvent Front Mutations Mediate Acquired Resistance to Selective RET Inhibition in RET-Driven Malignancies. Journal of Thoracic Oncology Vol. 2020.15 No. 4: 541-549.

7. Pre-clinical characterization of potent and selective next-generation RET inhibitors. Loxo Oncology at Lilly. Presented at: AACR Annual Meeting 2021.