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乳腺癌类器官培养基

乳腺癌类器官培养基是一款促进乳腺癌类器官体外形成和扩增的培养基。该产品为无菌的液体混合系统,含有维持目的细胞生长所必需的氨基酸、维生素、有机和无机化合物以及生长因子等。该培养基的独特配方可以提供一个合适的细胞所需营养环境,促进人乳腺癌类器官的体外生长和扩增。
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使用说明
产品说明

  乳腺癌类器官培养基是一款促进乳腺癌类器官体外形成和扩增的培养基。该产品为无菌的液体混合系统,含有维持目的细胞生长所必需的氨基酸、维生素、有机和无机化合物以及生长因子等。该培养基的独特配方可以提供一个合适的细胞所需营养环境,促进人乳腺癌类器官的体外生长和扩增。

使用说明

  4℃避光保存1个月内有效。

  1. 乳腺癌类器官培养

  将取自乳腺癌患者的样本进行分离和消化,消化后的细胞悬液进行计数,按每孔1~2X104个细胞密度计算所需细胞数,根据计算好的体积吸取细胞悬液加入预冷的1.5 ml离心管中,离心,弃上清,将细胞沉淀置于冰上。按1:2体积比,将一份体积的含1%BSA的DMEM培养基加入2份体积的的细胞外基质胶(Corning#356231)中,轻轻混匀(全程冰上操作),然后在冰上将配好的基质胶混合液与细胞沉淀充分混匀。细胞沉淀与基质胶的混合液按照35 μL/孔滴在已提前预热好的24孔板中间,使之形成圆顶状胶滴。缓慢将细胞培养板移至培养箱至少30 min,待基质胶完全凝固,沿24孔壁缓慢加入1 mL/孔预先恢复至室温的本类器官培养基,并将培养板置于37℃,5%CO2条件下静置培养。镜下观察类器官形成情况,每2~3天更换一次培养基。

  2. 乳腺癌类器官的收集

  弃去培养基,每孔加入1mL基质胶解离试剂并用该试剂润洗枪头,轻轻吹打圆顶状胶滴表面,将胶滴吹散,并将吹散后的含类器官的混合液收集至15 ml离心管中。重复一次本次操作,将两次洗脱下来的类器官合并收集于同一15 ml离心管中。37℃,75 rpm水平摇床上解离10 min(具体解离时间根据实际情况决定,以无明显大块胶状物为准),10 min后在4℃下,300g,离心5 min,小心吸弃上清,沉淀待用。

  3. 乳腺癌类器官传代

  收集好的细胞沉淀(以无肉眼可见基质胶状沉淀为准)加入预冷的含1%BSA的DMEM培养基重悬,300 g,离心5 min,小心吸弃上清,沉淀再次用含1%BSA的DMEM培养基重悬并计数,按照步骤1操作,以大约1000个类器官/孔密度重新接种类器官,并继续扩大培养。

关键词:
乳腺癌类器官培养基
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