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    胃癌类器官培养基_纯图版0.pdf

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胃癌类器官培养基

胃癌类器官培养基是一种为促进人源胃癌类器官体外形成和扩增而开发的培养基。它是一种无菌的液体混合系统,含有必需和非必需的氨基酸、维生素、有机和无机化合物、生长因子、微量矿物质等。该培养基的独特配方可以提供一个合适的人源胃癌类器官体外培养环境,选择性地促进体外人源胃癌类器官的生长。
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使用说明
产品说明

  胃癌类器官培养基是一种为促进人源胃癌类器官体外形成和扩增而开发的培养基。它是一种无菌的液体混合系统,含有必需和非必需的氨基酸、维生素、有机和无机化合物、生长因子、微量矿物质等。该培养基的独特配方可以提供一个合适的人源胃癌类器官体外培养环境,选择性地促进体外人源胃癌类器官的生长。

使用说明

  1. 胃癌类器官培养

  将获取的胃癌原代细胞悬液计数,根据计算好的体积吸取细胞悬液加入预冷的1.5 mL离心管中,补齐预冷的培养基至所需体积,将预冷后的细胞悬液加入等体积的Matrigel基质胶(Corning)中轻轻混匀(全程冰上操作),使得胃癌原代细胞终浓度为5X106个细胞/毫升。然后将细胞与基质胶的混合液按照50-60 μL/孔呈半球形点胶于24孔板。将培养板放入5%CO2、37℃培养箱中30 min,待Matrigel胶完全凝固。沿孔壁每孔缓慢加入500 μL预先恢复至室温的类器官培养基,置5%CO2、37℃培养箱培养。3天后镜下观察类器官形成情况,粒径大于30~50 μm即认为类器官已经形成,每3天更换一次培养基进行培养,持续观察类器官大小,镜下观察大部分类器官大小均大于30~50 μm且大小不再增大即可收集类器官进行后续实验。

  2.胃癌类器官收集

  弃培养基,每孔加入500 μL预冷DF12,反复吹打至基质胶完全脱离板底,收集至15 mL离心管中,1500 rpm离心5 min,轻轻吸去上清和基质胶层,待用。

  3. 胃癌类器官传代

  收集的类器官,加入3-5 mL类器官解离试剂(PRS-ODR),37℃,200 rpm水平摇床振荡消化(具体时间根据类器官大小和数量决定,以肉眼可见颗粒明显减小一半为准,可中间取消化的类器官显微镜观察,类器官消化至包含有3~10个细胞的细胞团块最佳);消化完全后采用等体积的含10% FBS的DMEM培养基终止消化。1500 rpm离心3 min,弃上清,使用清洗液重悬沉淀后1500 rpm再次离心3 min;加入预冷的胃癌类器官培养基进行重悬,计数,按照培养步骤操作继续培养。

关键词:
胃癌类器官培养基
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