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类器官冻存液是一种适用于冻存类器官的冻存试剂。本类器官冻存液含DMSO、葡萄糖等各种细胞营养成分,可提高复苏后细胞的存活率和细胞扩增效率。
2~8℃避光保存1个月内有效,-20℃避光保存1年内有效。
1、冻存步骤
(1) 类器官解离后,将所需数目的细胞悬浮液置于离心管中,1200 rpm,3 min离心收集培养细胞沉淀,彻底弃去离心管中的上清液。
(2) 加入适量的类器官冻存液于离心管中,轻柔混匀,制成混合液。
(3) 将离心管中的混合液分装于已标记的冻存管中,建议每管1 mL或1.5 mL。
(4) 直接将分装好的细胞冻存管放入梯度冻存盒(Thermo),并置于-80℃超低温冰箱短期冷冻保存,建议不要保存超过1周。如果需长期保存,需先放入-80℃冰箱至少一天时间,并移至液氮罐中保存。
2、复苏步骤
(1) 取出冻存类器官的冻存管,立即放入37℃水浴槽中快速解冻,需在1~2 min内将管内液体完全融化。
(2) 待冻存管中液体完全融化后,将其所含的细胞冻存液移至含有10 ml该类器官培养基的离心管中,1200 rpm,5 min离心,收集细胞沉淀,移去上清液(操作时小心,切勿将细胞沉淀弃去)。
(3) 在离心管中缓缓加入适量的新鲜该类器官培养基,轻柔地混匀,根据研究需要和方法进行后续培养。
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