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    原代鼻咽癌条件重编程培养基02.24-01.pdf

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原代鼻咽癌条件重编程培养基

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使用说明
产品说明

       原代鼻咽癌条件重编程培养基是一种为促进鼻咽癌原代细胞体外生长而设计的培养基。它是一种无菌的液体混合系统,含有必需和非必需的氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质等。该培养基产品基于碳酸氢盐的缓冲体系,在5%CO2/95%空气的培养箱中平衡时,PH值为7.4,该培养基的配方可以提供一个最佳平衡的营养环境,选择性地促进体外人鼻咽癌原代细胞的生长。

使用说明

2~8℃避光保存1个月内有效,-20℃避光保存1年内有效。

 

  1.鼻咽癌原代细胞培养

 

  (1)  初次分离的鼻咽癌小样本细胞悬液一般无需计数,直接种入12孔板中。

 

  (2)  鼻咽癌术中样本过70微米筛网后计数接种在合适的培养器皿中,加入γ射线辐照后的NIH-3T3细胞,放置37℃、5%CO2培养箱中培养。

 

  (3)  原代细胞初次接种后2-3天勿动(利于细胞贴壁),培养过程中若培养基颜色变黄但细胞未长满时可换半液,镜下观察细胞未长满但3T3细胞已不足时,适量补充γ射线辐照后的3T3细胞(一般补加初始数目的一半)。

 

  2.鼻咽癌原代细胞传代

 

  (1)  镜下观察细胞形成克隆,且汇合度达到80~90%时即可传代。

 

  (2)  培养箱中取出细胞,弃旧培养液,0.25%胰酶洗涤30秒后吸尽,再加入适量0.05%胰酶,37℃孵育,5 min后拿出轻拍培养瓶/板侧面,显微镜下观察细胞消化情况。

 

  (3)  细胞消化至细胞变圆并开始脱落时用终止培养基终止消化,并将细胞转移至离心管中,1500rpm离心3min。

 

  (4)  弃上清,以1-2mL相对应的原代细胞培养基重悬细胞,活细胞计数,将细胞悬液按适合的细胞密度接种于培养瓶/板,加入γ射线辐照后的NIH-3T3细胞。

 

  (5)  补加原代细胞培养基至所需体积,轻轻摇晃混匀,表面消毒后置培养箱,37℃ 5%CO2条件培养。

关键词:
原代鼻咽癌条件重编程培养基
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