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本产品包含各种酶法组织消化中常用的胶原酶等蛋白酶,能特异性地降解胞外胶原蛋白,使胶原蛋白和纤维粘连蛋白的网状结构解离,而不损坏细胞表面结构的完整性。使用本产品进行组织消化可以使组织中细胞间的桥连结构松动,使组织由块状变成絮状,经过机械吹打后制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液。制备的细胞悬液可用于原代培养、流式细胞仪进行细胞生物学(如凋亡、增殖、细胞周期等)研究。适用范围:各种正常和肿瘤组织,从中分离得到原代细胞,包括上皮细胞,间质细胞,成纤维细胞等。
-20℃避光保存6个月内有效。
(1)提前将消化酶从-20℃冰箱取出置于2-8℃融化;
(2)使用消化酶稀释液(货号:PRS-TDD-2)按照1:1比例稀释组织消化酶,配制成工作浓度;
(3)将组织转移至培养皿中,加入3 mL组织清洗液(货号:PRS-TCR-1)冲洗组织,反复2-3次;
(4)在无菌条件下将组织机械切割成1~2 mm3大小之后转移至15 mL无菌离心管中;
(5)加入5 mL组织清洗液,1500 rpm 常温离心3 min;
(6)弃上清,加入12mL工作浓度的消化酶,标记样本名称及编号并封口,放入恒温振荡培养箱中消化,设置参数37 ℃、200~300 rpm(根据样本质地设置转速),待组织消化呈团絮状,没有明显肉眼可见硬块终止消化;
(7)取出消化好的样本,1500 rpm 常温离心3 min。
(8)弃上清后,加入6mL含血清培养基进行终止消化,1500 rpm 常温离心3 min。
(9)弃上清后加入稀释液待用。
注意事项
1. 本产品在使用前需在2-8℃溶化后使用,融化后需在一周内使用完毕。
2. 使用产品时应注意无菌操作,避免污染。
3. 本产品储存浓度为工作浓度的2倍,使用前需要用稀释液按照1:1稀释。
4. 为保持本产品的最佳使用效果,一般在37℃条件下使用,根据具体实验情况也可在2-8℃条件下使用。
5. 请于保质期内使用本产品,超出保质期后,将无法达到理想的使用效果。
6. 本产品仅用于科研用途,不能用于体外诊断。
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